细胞贴壁体不理想，为什么贴壁细胞不会在体内单层生长

一般来说，漂浮细胞是死细胞。

如果确定漂浮细胞是活的，则细胞附着可能存在问题，可以通过在培养系统中添加适量的粘附和扩散因子来改善粘附条件。

如果确定漂浮细胞已经死亡，则与细胞的生长状态有关。 通过频繁更换培养基、频繁通过等方式，可以改善细胞的生存状态。 如有必要，您可以尝试不同的培养基。

当然，也应该排除细胞是否感染了支原体、病毒和黑胶蠕虫。 由于这些感染不会导致大量细胞同时死亡，因此它们的影响会在一段时间后慢慢显现出来。

对于消化，胰蛋白酶消化一般为1-5min。 这取决于你培养的细胞的贴壁能力，可以用相差显微镜观察，如果你发现细胞是圆形的，则说明消化良好。 最好轻吹。

细胞不贴壁的原因太多了，养的两类细胞也不需要添加贴壁因子，对消化时间和吹气强度也没有太严格的要求。 首先检查你的培养基是不是正品（亲身体验，假培养基会杀人），然后你可以换一个品牌的培养瓶或培养板（如果你有钱，建议用nuck），再看看有没有污染，但这些检测试剂盒通常要花很多钱， 而且真的没有办法换到其他实验室进行培养。

准确地说，细胞在没有粘附壁的情况下生长后会变成圆形。

细胞附着的原理是细胞能够产生粘附在培养皿表面的粘附分子。 当酶处理或培养皿表面发生变化时，粘附分子被破坏，细胞失去粘附力，然后细胞由于表面张力而变成球形。

体外培养细胞的重要生长特征包括粘附和拉伸，以及接触抑制和生长的密度限制。 粘附和拉伸是大多数体外培养细胞的基本生长特征。

虽然淋巴细胞等血细胞不倾向于在体内聚集，并且可以在体外悬浮中生长，但大多数哺乳动物细胞在体内和体外生长，其底物可以是其他细胞、胶原蛋白、玻璃或塑料。 培养的细胞在附着在基质上之前通常呈球状; 当附着在基质上时，细胞会逐渐伸展形成一定的形状，呈成纤维细胞样或上皮样。 电池与基板的附着不是一个能源密集型过程，并且被认为与电荷有关。

根据数据，在37小时内，细胞之间可以在2分钟内形成键，这种键可以作用于胰蛋白酶，并且只发生在细胞之间，而不发生在细胞和底物之间。 形成稳定的粘合需要 8 分钟。

一些特殊的细胞附着促进物质（如层粘连蛋白、纤连蛋白、III型胶原、血清扩增因子等）可能参与细胞附着过程。 这些细胞附着因子是存在于细胞膜表面或培养液（尤其是血清）中的蛋白质。 在培养过程中，这些带正电荷的粘附促进剂首先被吸附在基质上，然后将悬浮的圆形细胞附着在被粘附促进剂吸附的基质上，细胞将拉伸成原来的形态。

一般来说，已经脱离底物的贴壁生长细胞不能长时间悬浮生长，会逐渐变性，除非是转化细胞或恶性肿瘤细胞。

细胞之所以能粘附生长，是因为细胞表面可以表达与周围环境强烈结合的蛋白质，例如粘附分子，而这些粘附分子的表达受到其他蛋白质的影响，也就是你所说的粘附因子。 如果培养基中没有贴壁因子，则细胞不表达粘附分子，细胞不能贴壁生长。

1.细胞单独用胰蛋白酶消化，消化后的细胞易形成团块，吹气后不易变成单细胞，消化时间要掌握和控制，容易浮起;

2.用（w v）胰蛋白酶-mm乙胺四乙酸乙胺四乙酸溶液消化，感觉应该在几秒钟的时间内消化完毕，而且处理速度应该很快，我曾经丢弃过胰蛋白酶后，几乎看不到细胞，使用丁香海豚的胰蛋白酶+乙二胺四乙酸可能是更好的方法;

3.我感觉在墙上不是特别强壮，一般在一代后传芹菜大队8到10个小时。 瓶子可能很傻，这是一个问题，我用了一个玻璃瓶，它没有单独涂布，也许用聚赖氨酸涂层会更好。

细胞在没有培养基的情况下在贴壁生长后不久死亡，但如果冷冻，可以储存很长时间。

在没有营养的情况下，它应该很快就会死亡。

考虑到细胞生长和增殖需要空间，你这样做是正确的，当没有空间时，细胞就会停止生长。

细胞密集传递，10%的血清就足够了。 没关系。

培养基中可能有细菌，或者没有杀菌。