革兰氏染色时，如何保证染色过程正确 可靠的结果 5

在同一张载玻片的两端，对已知的革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌和未知杆菌进行革兰氏染色; 同样，在另一张载玻片上，对已知的革兰氏阴性细菌大肠杆菌和要鉴定的未知杆菌进行革兰氏染色。 通过将待鉴定的杆菌的革兰氏染色结果与同一组实验中引入的已知对照细菌进行比较，可以确定待鉴定细菌的革兰氏染色结果。 因此，可以排除染色中可能出现的假阳性和假阴性。

关键在于染料溶液，尤其是结晶紫的浓度和脱色时间，如果控制不好，最常见的情况是导致阳性菌变成阴性结果，阴性菌变成阳性结果。 另外，冲洗时要小心，否则一些不太好的固定样品会脱落，影响效果。

一般用结晶紫染一分钟，再用碘溶液染一分钟，用酒精脱色的时间在书上大多说一分钟，但要求是要等到颜色不脱落，才能重新染一分钟。

这些时间取决于您正在制作的染料的浓度、房间内的温度和标本的厚度。 而其他因素则掌握在自己手中，不必遵循一定的标准。

影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是脱色剂乙醇的处理为了保证革兰氏染色结果的正确性，需要控制乙醇脱色时间，尽量使用标准染色方法。

实验中经常出现假阳性和假阴性，假阳性主要是由于脱色不完全，这可能是由于涂片太厚或结晶紫染色过多，导致脱色不完全。

革兰氏染色的原理：

结晶紫和碘液体媒染剂经过初步染色后，形成不溶于细胞壁的结晶紫和碘络合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁厚、肽聚糖网层和致密交联，因此当它们用乙醇或丙酮脱色时，由于失水而减少网孔， 而且不含脂质，所以在乙醇处理上不会有缝隙，所以结晶紫和碘络合物可以牢牢地留在壁上，让它仍然是紫色的。

但由于其细胞壁薄，外膜层脂质含量高，肽聚糖层薄，交联不良，以脂质为主的外膜在遇到脱色剂后迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网络不能阻止结晶紫和碘络合物的溶解，因此经乙醇脱色后仍为无色， 然后用沙黄等红色染料复染，使革兰氏阴性菌变红。

以上内容参考：

革兰氏染色。

一般包括初级染色、媒染染色、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法有：

1）涂片固定。

2）草酸铵。

将结晶紫染色 1 分钟。

3）用蒸馏水冲洗。

4） 盖上碘溶液约1分钟。

5）用清水清洗，用吸水纸吸水。

6）加入几滴95%酒精，轻轻摇晃脱色，20秒后用清水洗涤吸水。

7）染色1分钟后，用蒸馏水冲洗。干燥，显微镜检查。

影响革兰氏染色结果正确性的环节主要是手绘、加热固定、脱色等过程。 最关键的环节之一是脱色过程。

常用的革兰氏染色剂由哈克冰雹肢修饰。

操作步骤为：生产。

初染、媒染、脱色、复染、干燥、观察。 影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是脱色剂乙醇的使用。

为了保证革兰氏染色结果的正确性，必须控制乙醇脱色时间，并尽可能采用标准化的染色方法。

革兰氏染色法一般包括四个步骤：初染、媒染染、脱色和复染。 结果：革兰氏阳性菌为蓝紫色，革兰氏阴性菌为红色。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学成分和生理性质上存在许多差异，染色反应也不同。 现在人们普遍认为，革兰氏阳性菌含有核蛋白、镁盐和多糖的特殊复合物。

它与碘和结晶紫的络合物结合非常牢固，不易脱色，阴性菌络合物结合度低，吸附染料差，容易脱色，是染色反应的主要依据。

由于老化，脱色是革兰氏染色中最关键的乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节：脱色不足，阴性菌误感染成阳性菌; 过度脱色，阳性菌被阴性菌误染。 因此，脱色时间一般控制在20-30s。

革兰氏染色。

它是细菌学中广泛应用的重要鉴别染色方法，属于复染法。 这种染色方法是丹麦制造的。

1884年由医生Gram发明的香华最初用于识别肺炎球菌。

肺炎克雷伯菌。 革兰氏染色法一般包括初级染色、媒染染色、脱色和复染四个步骤。

染色原理：

经过一次染色和媒染染后，细胞内形成不溶于水的结晶紫。

单碘大分子复合物。 由于革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，分子交联较紧密，肽聚糖网在用乙醇洗脱时会因脱水而明显收缩，且基本不含脂质，因此乙醇处理无法溶解壁上的缝隙。

结果，结晶紫和碘络合物仍然牢牢地困在细胞壁中，使其呈紫色。 革兰氏阴性菌由于其壁薄，肽聚糖含量低，交联松散，所以经过乙醇处理后，肽聚糖网不易收缩，并且具有较高的脂质含量，因此当乙醇溶解脂质时，细胞壁上会有较大的间隙，复合物很容易溶解出细胞壁， 因此，在用乙醇脱色后，细胞变得无色。

此时，红色染料被复染，革兰氏阴性菌将获得一层新的颜色——红色和革兰氏阳性菌。

还是紫色的。

革兰染色这个操作的关键是严格控制酒精脱色的程度。 因为如果脱色过度，阳性菌就会被误染成阴性菌; 如果脱色不够，阴性细菌可能会被误染成阳性细菌。

革兰氏染色是细菌鉴定最常用的染色方法之一。 未染色的细菌在显微镜下极难观察，因为它们与周围环境之间的折射率差异非常小。 染色后，细菌与环境形成鲜明的对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列和一些结构特征，可用于分类鉴定。

革兰氏染色是一种复染方法，即标本固定后，不使用四肢，先使用龙胆紫。

染色，媒染剂用碘溶液，然后用酒精脱色，再用稀释和发红复染。 除了染色后可以看到的细菌形态外，细菌还可以分为两类，即那些没有被酒精脱色并保留紫色的细菌是革兰氏阳性菌。

g)。那些被酒精脱色和复染成红色的人是革兰氏阴性菌。

g-)。革兰氏染色的原理尚不确定，可能与细菌携带的核糖核酸有关。

细菌壁结构的渗透性，等电点。

和其他因素。 金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌和炭疽芽孢杆菌等致病菌是革兰氏染色阳性菌。

百日咳杆菌，大肠杆菌，伤寒杆菌，痢疾杆菌，霍乱弧菌，流行性脑膜炎。

梁球菌和淋病均为革兰氏阴性菌。 因此，根据细菌的革兰氏染色特性，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，做出疾病的诊断。 由于各种抗石硝酸菌的抗菌谱不同，革兰氏染色仍可作为抗生素选择的参考。